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血清HBV-DNA与HBV免疫标志物相关性探讨

添加日期:2014/5/9 10:26:36 访问次数:1888次

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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV ) DNA定量测定对临床诊疗,抗病毒治疗效果考核及预后判断均具有重要意义。本文采用荧光定量PCR法对7000份收集在2004年7月~2005年7月期间来我院就诊的检测HBV感染的血清标本进行HBV DNA定量检测,并与ELISA法测定HBV感染血清学标志物的结果进行对比,现将其报告如下。

1 材料与方法

1.1主要试剂和仪器  (1)仪器。自动荧光PCR仪(PE5700型,美国Perkin Elmer公司); 酶标仪(BIO RAD Model 550); 洗板机(BIO-RAD Model 1575)。(2)检测对象。7000例患者,其中男3600例,女3400例,年龄2~78岁。(3)试剂。HBV DNA荧光定量检测试剂购自中山医科大学达安因诊断中心,FQ-PCR定量范围: 0~110/ml样品, ELISA试剂盒由深圳月亮湾生物工程有限公司。

1.2 方法 晨抽空腹血,放真空无菌采血管中,分离血清后经检测:标本无溶血。HBVm的检测 采用ELISA法。操作及结果判读按试剂说明书。

1.3 质量监控 实验都设阴性、空白及含量不同的阳性标准对照,并严格按照操作要求。

1.4 统计学方法  荧光定量计算HBV-DNA的拷贝数采用对数平均值,以拷贝数>1.0×103定为阳性[2]。大三阳组与其它各组的比较采用X2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

乙肝病毒的FQ-PCR HBV DNA检测结果与免疫标志物(HBVm)ELISA法检测结果见表1。

表1 ELISA检测乙肝病毒血清免疫标志物模式和FQ-PCR检测HBV- DNA的结果对比

分组

HBVm阳性

模式

例数(%)

HBV-DNA阳性

例数(%)

HBV-DNA

阳性定

量平均值

(拷贝/mL)

HBsAg、HBeAg、抗-HBc

  (大三阳)

1,3,5

2940(42%)

2646(90.00)

3.76×107

HBsAg、抗-HBe、抗-HBc

  (小三阳)

1,4,5

2200 (31%)

374 (17.00)*

1.73×106

HBsAb、HBcAb

2, 5

210(3%)

1(0.48)*

7.31×104

HBsAb、

HBeAb、HBcAb

2,4,5

140(2%)

2(0.96)*

7.98×103

HBsAg、HBcAb

1, 5

980(14%)

297 (30.31)*

6.1×106

HBcAb

5

140(2%)

5(3.57)*

3.11×104

抗-HBe、抗-HBc阳性

4,5

210 (3%)

3(1.44)*

6.74×103

抗-HBs阳性

2

210(3%)

1(0.48)*

4.36×103

全阴

阴性

350 (5%)

4(1.14)*

1.23×104

*P<0.05,与大三阳组比较HBV- DNA与HBeAg的相关关系,将HBsAg阳性的6120例血清标本,按照HBeAg是否阳检出HBV DNA在HBeAg阳性组的2940例标本中,有2646例

检出HBV DNA,检出率为90.00%,而在HBeAg阴性的3180标本中,有671例检出HBV DNA, 检出率为21.10% , 虽然HBeAg阳性的HBV DNA的检出率明显多于HBeAg阴性(P<0.05)。

3 讨论

 “大三阳”血清中HBV DNA阳性检出率高于其它组,“小三阳”血清中,仍一些可检出HBV DNA。e抗原阳性表明病毒复制活跃,传染性强。HBsAg、抗-HBc阳性组的血清标本中,HBV DNA检出率虽低于“大三阳”组,但高于“小三阳”组(P<0.05),提示该组的病毒复制不容忽视。单项抗-HBc阳性的患者体内仍有HBV复制,不过其检出率很低,可能因患者感染过乙肝病毒,仍有病毒残留。在各种HBVm模式中,以HBeAg阳性者的病毒复制水平最高;在HBsAg、抗-HBc阳性的血清中存在中等水平的HBV复制;而在HBVm全阴性的血清标本中,仍有检出HBV DNA,可能是病人处于感染早期,故HBV DNA的检出早于标志物;抗-HBs阳性组DNA仍有一定的拷贝数,均表明血清中未检出HBVm者并不能排除HBV感染[3]。运用定量PCR方法检测HBV DNA,可较准确地提供HBV感染复制状况,对临床判定患者血液的传染性,选择抗病毒药物以指导临床治疗等方面都意义重大。

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